Häufig gestellte Fragen zu defekten Zellen

(1) E. Coli drückt fremdeiweiß. Wenn beschallt, schwebt es in PBS mit 1 % Triton-X-100. Die Wirkung des Ultraschalls ist besser. Die Wirkung von 1 % Triton-X-100 ist noch auf der Hand. Einige andere Bakterien auch arbeiten, wie z. B. Streptomyces. Nachdem mit dem Ausdruck des rekombinanten Proteins, die Zellen durch Ultraschall Zellaufschluss gestört wurden, mit einem Eisbad, 400w, und für 2 s 1 s, zerkleinert, aber eine große Menge an Schaum entstanden in kurzer Zeit, die die vernichtende macht betroffen. Pbs und Tris-Puffer wurden wie folgt. Ist die Fragmentierung unvollständig und das Zielprotein ist in diesen ungebrochenen Zellen, was soll ich tun?

Analyse: Die Blase wird generiert werden, da die Sondenposition nicht gut geeignet ist; die Sonde muss nahe am Boden, etwa 0,5-1 cm; die Leistung variiert je nach Gerät, aber der Flüssigkeitsstand beobachtet werden, gibt es Schwankungen, aber nicht zu stark; Sie können Ultraschall Zellen des Brechers gebrochen für 3 s für 10 s und gebrochen für 20 - 30 Mal. Die Position des Horns sollte darauf hingewiesen werden. Wenn der Sound nicht stimmt, sollte es rechtzeitig angepasst werden; Angesichts der Konzentration von Bakterien. Versuchen Sie, die Lautstärke zu erhöhen, wenn Zerkleinern, die Stärke der Zui sollte 60 % nicht übersteigen; versuchen Sie, Pause 8 s 8 s, für einige bakterielle Proteine, ist es schwierig zu zerstreuen das Protein zu Protein-Denaturierung, Bläschen, produzieren, die ein wenig länger angehalten werden kann. Ein Protein in Form von Einschlusskörperchen gefunden.

2. Was sind die Voraussetzungen für die Beschallung von Streptomyces (Actinomyceten)?

Analytische: aktinomyceten (G + C) molaren Prozentsatz (mol-%) die grampositive (Eubakterien) verzweigte Gruppe auf dem phylogenetischen Baum von der prokaryotischen System, das die molekulare und biologischen Eigenschaften, die einzigartig in Prokaryoten gehören. Allerdings ist die chemische Zusammensetzung der Zellwand in ihren verschiedenen Gruppen sehr unterschiedlich. In der E. Coli-Ultraschall 400W wird verwendet, und die Methode 5 s 5 s zu brechen ist effektiv, aber es dient auf Streptomyces und wirkt sich nicht aufgrund der unterschiedlichen Zusammensetzung der Zellwand. Die Pre-spinnende-Behandlung von Streptomyces (Actinomyceten) ist in der Regel eine bestimmte Konzentration der Bakteriensuspension konfiguriert. Die besonderen Bedingungen für die Zerkleinerung mit Ultraschall Zelle Disruptor sind: sammeln die Bakterien in der 24 h-Kultur-Lösung bei 5 000 R / min für 5 min zum Sammeln der Zellen; Waschen mit einem pH 7,5 Na2HPO-NaH2PO-Puffer 3 Mal, und dann die Zellen in einer 1:3 Bakteriensuspension mit Puffer formuliert wurden. Platziert in einem großen Kunststoff Reagenzglas 40 mL; große Kunststoff Reagenzglas in ein Eisbad und zerdrücken mit einem Ultraschall Zelle Disruptor (Leistung 200W, 1/2"-Sonde, Crush für 30 s, intermittierende 30er Jahre); Zerkleinern die Lösung bei 12 000 u/min zentrifugieren bei hoher Geschwindigkeit für 30 min, sammeln zellenrückstand und überstand. Wash-Zellen können auch einmal mit vorgekühlten Kochsalzlösung oder Tris-HCl bei pH 8 gereinigt werden. Darüber hinaus variiert die Ultraschall Dosis stark mit der Menge der Probe und Bakterien. Die Macht 400-600w für 5 s, 5 s, hielt zerkleinert werden kann wird Eisbad und die Endkonzentration von 1 mM PMSF hinzugefügt. Um die entsprechenden Ultraschall Intensität und Häufigkeit zu bestimmen, ist es notwendig zu prüfen, ob die Bakterien zu jeder Zeit vollständig unterbrochen werden.