Häufige Probleme beim Aufbrechen des Ultraschallhomogenisators von Escherichia coli

E. coli exprimiert fremdes Protein. Bei Ultraschallbehandlung wird es in PBS suspendiert, das 1% Triton-X-100 enthält. Der Ultraschalleffekt ist besser. Die Wirkung von 1% Triton-X-100 ist immer noch offensichtlich. Werke wie Streptomyces.

Bakterienpräzipitation Probe 1 Puffer direkt zugeben, 5 ml Mercaptoethanol zugeben, mischen, zentrifugieren, 10 Minuten kochen, direkt einfüllen, färben und entfärben: Den Klebstoff 1 Minute in die entsprechende Menge der Färbeflüssigkeit in den Mikrowellenofen geben, färben Lösung wird durch eine große Menge ersetzt Das Wasser kann 10 Minuten in der Mikrowelle gekocht werden.

Nach der Expression des rekombinanten Proteins wurden die Zellen unter Verwendung eines Eisbads mit 400 W durch Ultraschallwellen aufgebrochen und 2S für 1 S gestoppt, es wurde jedoch in kurzer Zeit eine große Menge Schaum erzeugt, was die Zerkleinerungseffizienz beeinträchtigte. Sowohl der Pbs- als auch der Tris-Puffer waren gleich, und schließlich war das Zerkleinern unvollständig. Aber mein Zielprotein befindet sich in diesen ungebrochenen Zellen, weshalb ich keine experimentellen Ergebnisse erzielen kann.

Lassen Sie mich analysieren, warum diese Situation und Lösung.

1. Blasen werden erzeugt, weil Ihre Sondenposition nicht richtig positioniert ist. Die Sonde muss sich in der Nähe des Bodens befinden, ca. 1 cm (ich bin normalerweise 0,5 cm vom Boden entfernt). Das Instrument hat unterschiedliche Leistungsstufen, aber Sie können die beobachten Seite, es gibt Schwankungen, aber seien Sie nicht zu aggressiv.

2. Super 3S stoppt 10S, Ultraschall etwa 20 Mal, um den Effekt zu sehen

3. Achten Sie auf die Position der Hupe. Wenn Sie nicht korrekt sind, sollten Sie es rechtzeitig anpassen. Aus Sicht der Bakterienkonzentration sollten Sie außerdem versuchen, das Volumen beim Zerkleinern zu erhöhen. Die Festigkeit sollte 60% nicht überschreiten.

4. Versuchen Sie 8S für Super 8S. Bei einigen Bakterienproteinen ist es schwierig, die Wärme abzuleiten, was zu einer Denaturierung des Proteins und zur Bildung von Blasen führt. Machen Sie am besten eine kurze Pause. Dies ist häufiger in Form von Einschlusskörpern.