Experimentelle Schritte für Bruchhefe

Jul 15, 2019

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Versuchsmaterialien: Hefe, Sorbitolphosphatpuffer (Na 2 HPO 4: NaH 2 PO 4 = 77,4: 22,6), Schneckenenzym und Cellulase.


Versuchsdurchführung: 2 ml Bakterienlösung wurden in ein 2,5 ml-Sammelröhrchen gegeben, 1 min bei 12000 U / min zentrifugiert, der Überstand verworfen und der Vorgang einmal wiederholt. Resuspendieren Sie die Zellen, indem Sie 1 ml Puffer in das Zentrifugenröhrchen geben und dann 20 μl der Bakterienlösung entnehmen. Beobachten Sie die ursprüngliche Zellwandmorphologie der Hefezellen unter einem Lichtmikroskop und ordnen Sie dann die Enzymlösung (Schneckenenzym: Cellulase = 50: 10 μl) an. Wasserbad in einem 37-Grad-Wasserbad für 1 Stunde (während des Zeitraums, um die Ausfällung von Bakterien zu verhindern, kann das Zentrifugenröhrchen regelmäßig geschüttelt werden)


Nach Beendigung des Wasserbades wurden 20 ul Bakterienflüssigkeit in ein Zentrifugenröhrchen gegeben, um die morphologischen Veränderungen der Zellwand und der Zellmembran der Hefezelle unter einem Lichtmikroskop zu beobachten, und dann wurde der Ultraschall-Zellpulverisator zum Aufbrechen verwendet die bakterielle Flüssigkeit im Zentrifugenröhrchen, und das spezifische Verfahren wurde auf Strom gesetzt. 300w, Arbeitszeit 10min, Ultraschall offen 3S, Ultraschall aus 3S, Alarmtemperatur 70 Grad, können die spezifischen Parameter entsprechend der tatsächlichen Situation eingestellt werden, nachdem der Ultraschall die Bakterienflüssigkeit zu nehmen, um das letzte Stück zu machen, nehmen Sie 20ul Bakterienflüssigkeit unter dem Lichtmikroskop, um die Hefezellwand und morphologische Veränderungen in der Zellmembran zu beobachten.


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